所谓参比法,首先要选择一个用于比较的参考标准样 品,即一种发射和吸收属性都和我们感兴趣的样品接近的 已知样品,其 PLQY 值是已知。然后,分别测量参考标准 样和待测样品的吸收和荧光光谱;最后根据下图中的公式 计算出待测荧光样品的量子产率 QF,式中 QR 则是参考标 准样的量子产率,IF 和 IR 分别是未知样品和参考样品的积 分荧光强度,AF 和 AR 分别是未知样品和参考样品的吸收 值。该方法存在的问题是:有限数量的参考标准样品使这 种方法有一定的局限性。
,可以利用荧光寿命和不同浓度的 荧光猝灭剂来计算分子的量子产率。
右图公式中,Φf 代表量子产 率,kf 、knr 和 kt 分别是荧光、非辐射损耗和能量传递的 速率常数,τf 代表样品的荧光寿命。量子产率(PLQY) 由这些与荧光相竞争的非辐射过程,如荧光共振能量传递 (FRET)或 Stern-Volmer 猝灭所决定。
积分球法是一种直接测量量子产率 PLQY 的方法,球 壳内表面镀上硫酸钡基的材料或者 Spectralon® 的特殊材 料,具有全反射特性,可以捕获进出球内的光线,通过分 别测量样品和空白腔体的光谱,测出样品的荧光发射 (Ec) 和散射 (Lc) 以及空白腔体的发射 (Ea) 和散射 (La),就可以 按照图24所示公式计算出量子产率。
上式中,Eb 是样品因来自积分球的间接发光所致的 荧光积分,A 是样品在激发波长处的吸收值。如下图所示, 加上合适的光谱校正因子,经过简单的计算即可给出量子 产率 PLQY 以及相应的误差分析。
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